色譜柱日常維護(hù)
每天用足夠的時間來維護(hù)色譜柱，您將節(jié)省更多有利于處理色譜柱故障的時間，調(diào)試您的色譜柱的壽命也會變得更長，色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān)，最主要的是與日常維護(hù)密切相關(guān)。色譜柱的使用壽命主要根據(jù)柱效和柱壓兩個指標(biāo)來衡量，如果一支色譜柱的柱效太低或者太高，通常被認(rèn)為該色譜柱的使用壽命已盡結(jié)束。因此，延長色譜柱的使用壽命關(guān)鍵是，清除引起柱效下降和柱壓升高的因素，通過以下幾點(diǎn)幫戰(zhàn)您完成色譜柱的日常維護(hù)工作。
一、流動相的pH應(yīng)在使用范圍內(nèi)
以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱的pH范圍為2~9，流動相超過其pH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，壽命變短。
二、去除樣品和流動相匯總的固體顆粒
樣品和流動相中含有固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析前對樣品進(jìn)行針筒過濾，流動相過0.45um濾膜。
三、使用保護(hù)柱或在線過濾器
保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此除對樣品和流動相進(jìn)行過濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽使用不當(dāng)會使其在流動相（含有機(jī)溶劑）中析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時阻礙了基質(zhì)上的鍵合的碳鏈自由舒展，使用色譜柱的保留能力下降，柱效降低。
建議使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需要過濾流動相1.0ml/min流速沖洗60min.
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過濾流動相似1.0ml/min流速沖洗60min；分析完成后，再用該過濾流動以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
五、柱清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽：分析完成后，先后用上述方法除去緩沖鹽，然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min。
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凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對高分子物質(zhì)有很高的分離效果。
凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜主要用于高聚物的相對分子質(zhì)量分級分析以及相對分子質(zhì)量分布測試。目前已經(jīng)被生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛采用，不但應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。
那么，凝膠色譜柱應(yīng)該如何進(jìn)行清洗和存放呢？
1.色譜柱的清洗。
為了不使被測物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應(yīng)及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì)，此時應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應(yīng)先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內(nèi)的鹽，然后再用合適的溶劑來沖洗。
2.色譜柱的存放。
如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點(diǎn)：
a.幾天之內(nèi)的短期放置，凝膠柱則用蒸餾水來沖洗，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應(yīng)使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，凝膠柱則不能用水了，因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán)，以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象，因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。
c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下，如果放置于0℃以下的環(huán)境里，柱內(nèi)就會結(jié)冰，這也將導(dǎo)致柱效的降低。
色譜柱壓力過高或低的原因
色譜柱是高效液相的心臟，在液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透性，延長柱子的使用壽命是非常重要。色譜柱壓力過高、過低都屬于柱壓問題。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì)，造成流體阻力加大所致。下面大致總結(jié)為以下幾個方面： 1、流動相的前處理： 流動相或楊平中雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片，導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動相可能沒有過濾，或過濾不徹底，使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。另一個方面也可能沒有使用預(yù)保護(hù)柱所致。 2、樣品的沉淀： 當(dāng)流動相與溶解樣品的溶劑不一致時，樣品進(jìn)入色譜柱時，可能因溶解度降低而沉淀出來吸附于柱內(nèi)，造成壓力升高?！ ?i>3、晶體的析出： 使用含有緩沖液的流動相時，緩沖液中的無機(jī)鹽可能會殘留在體系之中，它們會因在新流動相中的溶解度降低而析出阻塞而壓力升高?！ ?i>4、細(xì)菌或霉菌滋生： 流動相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長霉菌堵塞濾板，導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時一般要現(xiàn)配現(xiàn)用?！ ?i>5、溶質(zhì)吸附： 一些溶質(zhì)在色譜柱上有較強(qiáng)大的吸附力，洗脫時流動相也難以清除掉，累積的未洗脫溶質(zhì)也會造成阻力增大從而造成壓力升高?！ ?i>6、流動相更換過度較快： 當(dāng)改變流動相體系時，不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動相存在于同一個體系之中，也會造成壓力升高?！?i> 7、壓力脈沖： 運(yùn)行過程中，有時會產(chǎn)生整個液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如泵壓力變化，此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化，填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大，造成壓力升高。
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