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色譜柱保留值與分離度重現(xiàn)性不好原因 色譜柱是如何工作的

時間:2020-08-31    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

問題

原因

表現(xiàn)

不同色譜柱間差異使用期間柱變化

填料、鍵合相不同

柱床破壞

鍵合相丟失

硅膠基質溶解

強保留組分堆積堵塞

保留因子(k), 分離因子(a

柱效(N

保留因子(k), 分離因子(a

柱效(N)

保留因子(k), 柱效(N)

柱外效應

系統(tǒng)差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。

柱效(N)

分離效果變差

流動相組分改變

流速改變

溫度改變

保留因子(k),柱效變化很小

保留因子(k), 分離因子(a)

保留因子(k), 柱效變化很小

柱平衡慢

重新平衡時間不夠

保留因子(k), 柱效變化很小

柱超載

樣品量太大

保留因子(k), 柱效(N)



    通用型反相色譜柱在使用前,可以進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要留意:液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。

    通用型反相色譜柱樣品的前處理:

    a、可以使用活動相溶解樣品。

    b、使用予處理柱除往樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質。

    c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質。

    通用型反相色譜柱的保養(yǎng):

    通用型反相色譜柱在使用前,可以進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為評價柱性能變化的參考。

    但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。在對色譜柱使用前進行測試以后,要根據(jù)不同的情況對色譜柱進行保養(yǎng):

    ①通用型反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng):使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。

    注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。

    ②長期保存色譜柱:如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度可以是室溫。





色譜柱安裝時需要注意的事項    色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。下面介紹色譜柱安裝時需要注意的事項。

  色譜柱的安裝:

  1)將液相色譜裝置中的流動相完全置換后再連接色譜柱,并完全排出流路內(nèi)的空氣。

  裝置內(nèi)的液體和所使用的流動相不能相溶的情況下,使用雙方都能相溶的液體做過渡。比如從水置換到氯仿的情況,就需要使用丙酮做過渡,才能完全置換。

  將鹽溶液置換成有機溶劑的時候,需要通過純水、丙酮的順序來進行置換。相反,從有機溶劑轉換成鹽溶液的情況下,需要通過丙酮、純水的順序置換。

  不僅僅是泵,流動相流動的所有流路都必須進行置換。例如,注入樣品的情況,軟管內(nèi)的液體也需要置換。另外,如果使用壓力計等別的軟管的情況,取下來的管子也必須由流動相洗凈后才能繼續(xù)使用。

  2)色譜柱保存方法不對或者長期不使用的情況下,色譜柱的出入口可能會有空氣殘留。這種情況下,必須先把空氣完全排出后才連接到裝置中。

  避免快速加熱,加熱溫度不要超過色譜柱的最高負荷溫度。

  把柱子入口側的螺栓打開,然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了),等液體滿出來以后接到裝置上。然后,打開出口處的螺栓,用泵送液,等確認出口處有液體流出后,連接到裝置中。這樣操作,就算后面再連接一根色譜柱也能完全除去空氣。

  3)在泵運作的時候連接色譜柱。確保能讓流動相按照色譜柱上箭頭的方向流動的狀態(tài)連接色譜柱。

  4)色譜柱加溫使用的時候,先用0.2~0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達到所定溫度后,再漸漸的增加流量至測定流量。

  5)色譜柱需要安定時間。連接到裝置中立即進行測試的情況下,第一次很難得到好的分析結果。

標簽: 色譜柱 色譜柱 色譜柱安裝時需要注意的事項_色譜柱

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