液相色譜儀的幾個使用問題

高效液相色譜儀的幾個使用問題
     1. 色譜柱中的流動相會排干嗎？
     不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補(bǔ)充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了。可以嘗試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。
    
     2. 使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意什么問題？
     如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。
     使用此類材料的管路需要注意的是：PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會超過3000psi）。
     使用PEEK接頭時則無需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時，可能會使接頭在管路上滑動而產(chǎn)生死體積或漏液。
    
     3. 如何預(yù)防液相泵的故障:
     要保持泵的良好操作性能,必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對流動相進(jìn)行過濾和脫氣.下面列出預(yù)防泵故障的幾項措施:
     1).用高質(zhì)量試劑和HPLC級溶劑；
     2）、過濾流動相和溶劑；
     3）、脫氣；
     4）、每天開始使用時放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；
     5）、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；
     6）、定期更換墊圈；
     7）、需要時加潤滑油；
     8）、查閱有關(guān)泵操作手冊中的其它建議。
     處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時間的重復(fù)性好。在等度洗脫時壓力波動小于2%。梯度洗脫時壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。
     為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險絲等部件，以及更換工具。

高效液相色譜常見問題

　　1、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？　?、俸Y板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。　?、诖嬖诟蓴_峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子　?、劭赡苤d，減少進(jìn)樣量?！　?i>2、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？　?、贅悠妨坎蛔悖鉀Q辦法為增加樣品量　?、跇悠肺磸闹又辛鞒觥？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子　?、蹣悠放c檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器　?、軝z測器衰減太多。調(diào)整衰減即可?！　、輽z測器時間常數(shù)太大。解決辦法為降低時間參數(shù)　　⑥檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗?！　、邫z測池中有氣泡。解決辦法為排氣?！　、?font data-color="#0268CA">記錄儀測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可?！　、崃鲃酉嗔髁坎缓线m。調(diào)整流速即可?！　、鈾z測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。　　3、做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？　?、俦脙?nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；　　②比例閥失效，更換比例閥即可；　?、郾?font data-color="#0268CA">密封墊損壞，更換密封墊即可；　　④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；　?、菹到y(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；　?、尢荻认疵摚@時壓力波動是正常的?！　?i>4、我購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時柱壓過高，請問為什么？　　柱壓過高是HPLC柱用戶經(jīng)常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。　　①拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；　?、诎?font data-color="#0268CA">色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；　?、蹖⒅拥倪M(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過的柱子。　?、芨鼡Q柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題?！　?i>5、色譜柱中的流動相會排干嗎？　　不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補(bǔ)充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。　　相比之下，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。　　6、為何出現(xiàn)峰展寬？　　①樣品體積過大--用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%　?、谠谶M(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展--進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散　?、蹟?shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢--設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)　?、軝z測器時間常數(shù)過大--設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%　?、萘鲃酉嗾扯冗^高--增加柱溫,采用低粘度流動相　?、迿z測池體積過大--用小體積池,卸下熱交換器　?、弑Ａ魰r間過長--等度洗脫時增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫　?、嘀怏w積過大--將連接管徑和連接管長度降至最小　?、針悠愤^載--進(jìn)小濃度小體積樣品　　7、除了在線脫氣，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？　　加熱回流脫氣，脫氣效果較佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。　　8、如何簡單判斷比例閥是否內(nèi)漏？　　設(shè)定泵使用一個單獨(dú)通路（A），打開Purge閥，流速5ml/min，提起其他溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭直至離開液面，觀察這些通路（B、C、D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動，正常時均不應(yīng)流動。

標(biāo)簽: 高效液相色譜 高效液相色譜 高效液相色譜常見問題_高效液相色譜  高效液相色譜儀的原理：　　分配系數(shù)與組分、流動相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)，也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)（或稱交換系數(shù)），凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。　　在條件（流動相、固定相、溫度和壓力等）一定，樣品濃度很低時（Cs、Cm很小）時，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質(zhì)濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進(jìn)樣量，使組分在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時，才能獲得正常峰。 　　儀器使用：　　高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。　　與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。　　HPLC成為解決生化分析問題Z有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。　　液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發(fā)烴類，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。 　　該儀器應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)域。　　1、分離混合物：高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。　　通過與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，高效液相色譜法所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)，能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對其的分離。　　2、生化分析：由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域，并已成為解決生化分析問題Z有前途的方法。　　3、儀器聯(lián)用：高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

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