處理液相色譜儀故障問題的幾個重要方法

液相色譜儀的故障問題也存在好幾種現(xiàn)象，不同的現(xiàn)象有不同的處理方法：　
　　第一、峰面積重復性不佳

　　(1)進樣閥漏液;(2)加樣針不到位。(3)液量不足.處理對于第一種情況更換進樣閥墊圈;對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉換到INJECT狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲液器內的溶液如長時間未用應清洗儲液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質,完全溶解,盡量減少對色譜柱的污染,以延長色譜柱的使用壽命,同時避免注射過濃的樣品溶液,以免殘留液在進樣閥內析出固體引起堵塞;色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。

第二、既無壓力指示,又無液體流過

　　(1)泵密封墊圈磨損;像這種情況,就應該更換密封墊圈;(2)大量氣泡進入泵體。而針對這種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

　　　　第三、壓力波動大,流量不穩(wěn)定

　　原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

　　第四、出峰不佳,峰分叉

　　(1)色譜柱被污染;處理這種情況時,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。(2)柱頭填料塌陷。針對這樣的現(xiàn)象，要擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結或塌陷。去除硬結部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

　　　第五、柱壓高原因

　　(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內;因此就是說，要先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;(2)樣品污染沉積。目前來說，這種情況要由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

　　第六、氣泡溢出

　　在這個問題上要與液相色譜儀的工作原理相掛鉤，流動相內有氣泡,關閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內,過濾器內部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;打開泄壓閥,打開泵,流速調至1.0～3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

關于液相色譜儀的故障問題還有不同的、具體的判斷方法等。

　　【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】選擇一臺好的液相色譜儀對企業(yè)、實驗室的生產(chǎn)工作有很大的幫助，那么選擇一臺好的液相色譜儀該注意哪些因素呢？首先是看指標，而液相色譜儀的指標很多，有泵的、檢測器的、色譜柱等等；然后就是國家標準，儀器的主要指標有噪音，漂移，zui小檢測濃度，定性定量重復性等，筆者將從這兩個方面一一為讀者朋友們分析。
 　　1、噪音
 　　噪音的大小直接關系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結果。
 　　2、漂移
 　　漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內基線漂離原點的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質的儀器能在較短的時間內達到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
 　　3、色譜柱
 　　色譜柱是液相色譜儀的心臟，通常要求柱效高、選擇性好，分析速度快等。目前市場上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達5~16萬/米。
 　　4、進樣器
 　　進樣裝置要求：密封性好，重復性好，死體積小，保證中心進樣，進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進樣方式多種多樣，可分為隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。自動進樣器則是市場發(fā)展的趨勢。
 　　5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
 　　一般專業(yè)的液相色譜儀生產(chǎn)廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件，但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數(shù)據(jù)工作站進行數(shù)據(jù)計算處理，在數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)方面需根據(jù)自身資金來調整。
 　　6、操作簡便
 　　操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的，操作越簡單不僅用戶上手更快，也有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。
 　　目前國內外都有著比較知名的液相色譜儀生產(chǎn)銷售企業(yè)，只要把握了以上幾點，并選擇較為知名的液相色譜儀生產(chǎn)銷售企業(yè)，相信讀者朋友們都能夠選購到心儀的液相色譜儀器。 　　液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。
　　
　　現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有、快速、靈敏等特點。一臺品質優(yōu)良的液相色譜系統(tǒng)應從以下幾個方面考慮：
　　
　　一、主要技術指標優(yōu)異：
　　
　　首先是如何看指標。液相色譜儀的指標很多，有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認為要看主要技術指標，根據(jù)國家標準，儀器的主要指標有噪音，漂移，zui小檢測濃度，定性定量重復性等。這些指標都要放在系統(tǒng)，回路里去看，去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好，如接好色譜柱，進樣閥，并且要通上流動相。因為您在分析中也都是聯(lián)接好以后才可以進行分析的，而不是單單用個檢測器或是泵的。
　　
　　然后在這個基礎上，我們再去比較這些主要指標。
　　
　　1、噪音
　　
　　是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結果。
　　
　　2、zui小檢測濃度（zui小檢測限）
　　
　　是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H（CL ：zui小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度zui小檢測濃度 H：樣品峰高）由上式可見，zui小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，zui小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標，說明他們不愿在zui小檢測濃度的基礎上去比較噪音。
　　
　　3、漂移
　　
　　是指儀器穩(wěn)定后一段時間內基線漂離原點的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質的儀器能在較短的時間內達到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
　　
　　4、定性定量重復性
　　
　　主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應該是十分的，這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結果才能使人信服。
　　
　　有的朋友會認為這些指標好像都是檢測器的。對的，但是就前面所說條件是要放在整個回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如：泵的脈動會直接影響噪音指標，泵的流量準確度、度指標，以及密封性不好也會影響相關指標。所以要系統(tǒng)地看指標。例如：某些公司在公布的指標中，噪音和漂移指標寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個指標只考核了UV檢測器光學和電氣的特性，與實際情況相差甚遠，并沒有考驗泵的壓力脈動，液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認為從以上的主要指標中可以反應出儀器的一些真實水平。
　　
　　二、操作方便：
　　
　　操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學儀器有限公司的工作站軟件實現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，在國內推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。
　　
　　三、系統(tǒng)的，整體開發(fā)
　　
　　這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象，說我的泵是進口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區(qū)。液相色譜是個復雜的系統(tǒng)，不是整體開發(fā)的，各項指標之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會高到哪里去，而且在售后服務方面對用戶也是不負責任的。
　　
　　整體開發(fā)的主要優(yōu)點有：各項技術指標統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實力。
　　
　　國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的，所以能夠保證儀器的整體水平。
　　
　　四、穩(wěn)定可靠，故障率低
　　
　　1、色譜柱的使用說明：
　　
　　(1)色譜柱使用前注意事項：
　　
　　色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用10％左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。
　　
　　(2)流動相：
　　
　　流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。 以常規(guī)硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDS C18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。
　　
　　(3)樣品：
　　
　　樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
　　
　　2、色譜柱的保存
　　
　　(1)反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng)：
　　
　　使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
　　
　　(2)長期保存色譜柱：
　　
　　如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
　　
　　3、色譜柱的再生
　　
　　因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。
　　
　　(1)反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90 (V/V)，乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
　　
　　(2)正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
　　
　　4、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法
　　
　　色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外)，可能的原因有如下幾點：
　　
　　(1)色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
　　
　　(2)色譜柱頭的填料被樣品污染；
　　
　　(3)色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出； (4)流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。
　　
　　解決辦法如下：
　　
　　(1)如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
　　
　　(2)如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
　　
　　(3)如確定定是鹽結晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
　　
　　(4)如果因PH值使用不當，很難恢復。

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