1.離心機應放置在水平堅固的地板或平臺上,并力求使機器處于水平位置以免離心時造成機器震動。
2.打開電源開關(guān),按要求裝上所需的轉(zhuǎn)頭,將預先以托盤天平平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上(離心筒須與樣品同時平衡),關(guān)閉機蓋。
3.按功能選擇鍵,設(shè)置各項要求:溫度、速度、時間、加速度及減速度,帶電腦控制的機器還需按儲存鍵,以便記憶輸入的各項信息。
5.待離心機完全停止轉(zhuǎn)動后打開機蓋,取出離心樣品,用柔軟干凈的布擦凈轉(zhuǎn)頭和機腔內(nèi)壁,待離心機腔內(nèi)溫度與室溫平衡后方可蓋上機蓋。
1.機體應始終處于水平位置,外接電源系統(tǒng)的電壓要匹配,并要求有良好的接地線.開機前應檢查轉(zhuǎn)頭安裝是否牢固,機腔有無異物掉入。
4.揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時,應使用帶蓋的離心管,并確保液體不外漏,以免腐蝕機腔或造成事故。
離心機是借離心力分離液相非均一體系的設(shè)備。根據(jù)物質(zhì)的沉降系數(shù)、質(zhì)量、密度等的不同,應用強大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮和提純的方法稱為離心。一般說, 離心機轉(zhuǎn)速在 20 000r/min 以上的稱為超速離心。離心技術(shù),特別是超速離心技術(shù)是分子生物學、生物化學研究和工業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的手段。
1924 年 T.Svedberg 和 Rinde 研制出世界上第一臺渦輪超速離心機以來,發(fā)展非常迅速,現(xiàn)在已廣泛地應用到科學研究和生產(chǎn)的各個領(lǐng)域?,F(xiàn)在離心機轉(zhuǎn)頭最高轉(zhuǎn)速已達 100000 r/min ,最大離心力達 700 000 g 。
離心機作為一種手段,具有許多優(yōu)點。例如,超速離心可在低溫下操作,保護了生物大分子的活性。制備型的離心機負載量大,一次可分離提純幾克樣品,比層析、電泳上的樣品量大得多。分析離心機不僅可測物質(zhì)的分子量,還可檢驗物質(zhì)的純度、構(gòu)象、沉降系數(shù)等。因此離心技術(shù)在生物學研究中占有重要的地位,是分離、純化細胞、病毒、蛋白、核酸和酶的較為方便比較有效的工具。
當含有細小顆粒的懸浮液靜置不動時,由于重力場的作用使得懸浮的顆粒逐漸下沉。粒子越重,下沉越快,反之密度比液體小的粒子就會上浮。微粒在重力場下移動的速度與微粒的大小、形態(tài)和密度有關(guān),并且又與重力場的強度及液體的粘度有關(guān)。象紅血球大小的顆粒,直徑為數(shù)微米,就可以在通常重力作用下觀察到它們的
此外,物質(zhì)在介質(zhì)中沉降時還伴隨有擴散現(xiàn)象。擴散是無條件的絕對的。擴散與物質(zhì)的質(zhì)量成反比,顆粒越小擴散越嚴重。而沉降是相對的,有條件的,要受到外力 才能運動。沉降與物體重量成正比,顆粒越大沉降越快。對小于幾微米的微粒如病毒或蛋白質(zhì)等,它們在溶液中成膠體或半膠體狀態(tài),僅僅利用重力是不可能觀察到沉降過程的。因為顆粒越小沉降越慢,而擴散現(xiàn)象則越嚴重。所以需要利用離心機產(chǎn)生強大的離心力,才能迫使這些微??朔U散產(chǎn)生沉降運動。
離心就是利用離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強大的離心力,加快液體中顆粒的沉降速度,把樣品中不同沉降系數(shù)和浮力密度的物質(zhì)分離開。離心力 (F) 的大小取決于離心轉(zhuǎn)頭的角速度 ( ω , r/min) 和物質(zhì)顆粒距離心軸的距離 (r , cm) 。它們的關(guān)系是: F = ω 2R
為方便起見, F 常用相對離心力也就是地心引力的倍數(shù)表示。即把 F 值除以重力加速度 g ( 約等于9.8m/s2.) 得到離心力是重力的多少倍,稱作多少個 g 。例如離心機轉(zhuǎn)頭平均半徑是 6cm ,當轉(zhuǎn)速是 60 000
r/min 時,離心力是 240 000 × g ,表示此時作用在被離心物質(zhì)上的離心力是日常地心引力的 24 萬倍。 因此,轉(zhuǎn)速 r/min 和離心力 g 值之間并不是成正比關(guān)系,還和半徑有關(guān)。同樣的轉(zhuǎn)速,半徑大一倍,離心力 (g 值 ) 也大一倍。轉(zhuǎn)速 (r/min) 和離心力 (g 值 ) 之間的關(guān)系可用下式換算:
用離心方法分離生物大分子和亞細胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們在液體介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶,或者它們的密度 不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開。前者是沉降速度法,應用該法時液體介質(zhì)的最大密度要小于樣品中最小顆粒的密度,離心時選用高轉(zhuǎn)速和短時間;后者是沉降平衡法,應用該法時液體介質(zhì)的最大密度要大于樣品中最小顆粒的密度,離心時選用較低轉(zhuǎn)速和較長時間。實際操作有幾種形式:
1. 差速離心這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。
這種方法比較簡單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時間,這樣大小相近的顆粒也會沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
2. 速度區(qū)帶 ( 或速度梯度 ) 離心 本法是將樣品放在一個連續(xù)的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液 (5%-60%) 配成梯度,用于梯度離心。再分別進行收集處于不同區(qū)帶里的各個組份。
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離心機有一個繞本身軸線高速旋轉(zhuǎn)的部件,稱為轉(zhuǎn)子,通常由電動機驅(qū)動。
懸浮液(或乳濁液)加入轉(zhuǎn)子后,被迅速帶動與轉(zhuǎn)子同速旋轉(zhuǎn),在離心力作用下各組分分離,并分別排出。通常,轉(zhuǎn)鼓轉(zhuǎn)速越高,分離效果也越好。
離心機使用和操作注意事項:
1.離心機運轉(zhuǎn)前應先切斷電源,并可以用手試轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)子,看有無咬煞情況;
2.檢查其他部位有無松動及不正常情況;
3.使用各種離心機時,必須事先在天平上精密地平衡離心管和其內(nèi)容物,平衡時重量之差不得超過各個離心機說明書上所規(guī)定的范圍;
每個離心機不同的轉(zhuǎn)頭有各自的允許差值,轉(zhuǎn)頭中絕對不能裝載單數(shù)的管子;
當轉(zhuǎn)頭只是部分裝載時,管子必須互相對稱地放在轉(zhuǎn)頭中,以便使負載均勻地分布在轉(zhuǎn)頭的周圍。
4.裝載溶液時,要根據(jù)各種離心機的具體操作說明進行,根據(jù)待離心液體的性質(zhì)及體積選用適合的離心管,有的離心管無蓋,液體不得裝得過多;
以防離心時甩出,造成轉(zhuǎn)頭不平衡、生銹或被腐蝕,而制備性超速離心機的離心管,則常常要求必須將液體裝滿,以免離心時塑料離心管的上部凹陷變形。
5.每次使用后,必須仔細檢查轉(zhuǎn)頭,及時清洗、擦干,轉(zhuǎn)頭是離心機中須重點保護的部件,搬動時要小心,不能碰撞,避免造成傷痕,轉(zhuǎn)頭長時間不用時,要涂上一層上光臘保護,嚴禁使用顯著變形、損傷或老化的離心管。
6.若要在低于室溫的溫度下離心時。轉(zhuǎn)頭在使用前應放置在冰箱或置于離心機的轉(zhuǎn)頭室內(nèi)預冷。
7.離心過程中不得隨意離開,應隨時觀察離心機上的儀表是否正常工作,如有異常的聲音應立即停機檢查,及時排除故障。
8.每個轉(zhuǎn)頭各有其最高允許轉(zhuǎn)速和使用累積限時,使用轉(zhuǎn)頭時要查閱說明書,不得過速使用。
每一轉(zhuǎn)頭都要有一份使用檔案,記錄累積的使用時間,若超過了該轉(zhuǎn)頭的最高使用限時,則須按規(guī)定降速使用。
9.嚴禁機器超速運轉(zhuǎn),以免影響機器使用壽命;
9.機器開動后,若有異常情況必須停車檢查,必要時需予以拆洗修理;
10.離心機工作時是高速運轉(zhuǎn),不要移動機器,以防意外;
11.為確保離心機正常運轉(zhuǎn),重要部件請按時保養(yǎng)。同時查看軸承處運轉(zhuǎn)潤滑情況,有無磨損現(xiàn)象;
12.機器使用完畢,應作好清潔工作,保持機器整潔;
13.另外嚴格按照設(shè)備要求、規(guī)定操作,非防爆型離心機切不可用于易燃、易爆場合。
離心機電源出現(xiàn)問題應該如何處理:
以下原因大部分均系不正確操作所致,在找出原因后,正確操作即可消除不正常現(xiàn)象。
在工作過程中,如出現(xiàn)任何異?,F(xiàn)象均應立即停機,不得強行運轉(zhuǎn),以免產(chǎn)生不必要的損失。
1、電源不通是導致冷凍離心機的冷凍機啟動及制冷效果差的原因之一,與電機不轉(zhuǎn)的故障相同,應分別檢查電源及保險絲。
2、電壓過低,安全裝置故障也可使冷凍機不能啟動,電壓過低可能是電網(wǎng)電壓低;
配電板配線過多;電源線過長(理想長度為3米)等。電源線容量不夠,不僅使電壓降低,還會造成意外事故。
當電源電壓降到180—190VJ時,冷凍機不能啟動,影響制冷效果。
3、通風性能不好,如儀器安裝在日光直射或通風不良處,散熱器效果差,或散熱器蓋滿灰塵,也中會影響制冷效果。
4、離心管重量不平衡,放置不對稱;轉(zhuǎn)子孔內(nèi)有異物,使負荷不平衡;轉(zhuǎn)軸上端固定螺帽松動,轉(zhuǎn)軸磨擦或彎曲;
電機轉(zhuǎn)子不在磁場中心會產(chǎn)生噪音;轉(zhuǎn)子本身損傷等都可導致機體震動劇烈、響聲異常。