依據(jù)Beer定律,物質(zhì)在一定波優(yōu)點(diǎn)的吸光度與濃度成正比,這是定量計(jì)算的根據(jù)。但是很多溶劑自身在紫外區(qū)有吸收峰或末端吸收,選用溶劑時(shí)應(yīng)思索溶劑自身吸收的干擾。選擇溶劑時(shí),被測(cè)組分的丈量波長(zhǎng)必需大于溶劑的截止波長(zhǎng)。
常用的定量剖析辦法有規(guī)范曲線法、規(guī)范對(duì)照法、吸光系數(shù)法及差示分光法等,以下引見(jiàn)前三種辦法。
1)規(guī)范曲線法
規(guī)范曲線法又稱(chēng)工作曲線法或校正曲線法。規(guī)范曲線法較簡(jiǎn)單,在儀器剖析中應(yīng)用普遍,對(duì)儀器的精度請(qǐng)求不高,合適剖析大批量的同類(lèi)試樣,但不合適剖析組成復(fù)雜的樣品。關(guān)于同一臺(tái)儀器,在肯定的工作狀態(tài)和測(cè)定條件下,吸光度A與溶液濃度c之間呈線性關(guān)系。
①測(cè)定辦法
首先配制一系列不同濃度的對(duì)照品溶液(或稱(chēng)規(guī)范溶液),在相同條件下分別測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo),相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),繪制規(guī)范曲線(如上圖),或依據(jù)二者的數(shù)值樹(shù)立回歸方程得A=bc+a。在相同的條件下測(cè)定試液的吸光度,從規(guī)范曲線或回歸方程中求出被測(cè)組分的濃度。
②采用規(guī)范曲線法應(yīng)留意的問(wèn)題
(1)制備一條規(guī)范曲線至少需求5~7個(gè)點(diǎn),并不得隨意延長(zhǎng)
(2)待測(cè)溶液濃度應(yīng)在規(guī)范曲線線性范圍內(nèi)。
(3)待測(cè)溶液和對(duì)照品溶液必需在相同條件下停止測(cè)定。
依據(jù)Beer定律,理想的規(guī)范曲線應(yīng)該是一條經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的直線。實(shí)踐上,常有規(guī)范曲線不
經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的現(xiàn)象。其緣由主要有幾方面,如空白溶液的選擇不當(dāng),顯色反響的靈活度不夠,吸收池的光學(xué)性能不分歧等,應(yīng)采取恰當(dāng)措施加以改善。
2)規(guī)范對(duì)照法
假如繪制的規(guī)范曲線是經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的,測(cè)定試樣時(shí)也可采用一種簡(jiǎn)化的辦法,即規(guī)范對(duì)照法。
在相同條件下配制規(guī)范溶液(s)和樣品溶液(x),在選定波優(yōu)點(diǎn),分別測(cè)其吸光度,依據(jù)Beer定律A=Ecl,因規(guī)范溶液和樣品溶液是同種物質(zhì)、同臺(tái)儀器及同一波善于厚度相同的吸收池中測(cè)定,故l和E均相等,因而Cx=Ax Cs/As。
應(yīng)用規(guī)范對(duì)照法的前提是繪制規(guī)范曲線需過(guò)原點(diǎn),且普通請(qǐng)求規(guī)范溶液與樣品溶液的濃度盡量接近,否則會(huì)惹起較大的誤差。
3)吸收系數(shù)法
依據(jù)Beer定律,若已知厚度l和吸光系數(shù)或百分吸收系數(shù),即可依據(jù)供試品溶液測(cè)得的A值求出被測(cè)組分的濃度。C=A/El
許多化合物的吸收系數(shù)或百分吸收系數(shù)能夠從有關(guān)手冊(cè)或文獻(xiàn)中查到。也能夠?qū)⒐┰嚻啡芤旱奈舛葥Q算成樣品的百分吸收系數(shù)或摩爾吸收系數(shù),然后與純品的吸收系數(shù)相比計(jì)算出樣品中被測(cè)組分含量。
假如查不到被測(cè)物質(zhì)的吸收系數(shù),或測(cè)定條件與手冊(cè)、文獻(xiàn)中不盡相同,則不能采用吸收系數(shù)法停止測(cè)定。
二、三種辦法的比擬
1)規(guī)范曲線法請(qǐng)求:
①A與c是一條直線或近似一條直線關(guān)系
②丈量過(guò)程中,請(qǐng)求儀器的工作狀態(tài)及丈量條件堅(jiān)持分歧。
③樣品濃度cx應(yīng)落在線性范圍內(nèi)
④規(guī)范溶液與試樣組成類(lèi)似
2)規(guī)范對(duì)照法請(qǐng)求:
①A與c是一條過(guò)原點(diǎn)或近似過(guò)原點(diǎn)的直線關(guān)系:A=a+bc 請(qǐng)求a=0
②丈量過(guò)程中,請(qǐng)求儀器的工作狀態(tài)及丈量條件堅(jiān)持分歧。
③樣品濃度cx應(yīng)落在線性范圍內(nèi),c樣與c標(biāo)盡量接近
④規(guī)范溶液與試樣組成類(lèi)似。
3)吸光系數(shù)法請(qǐng)求:
①A與C是一條過(guò)原點(diǎn)或近似過(guò)原點(diǎn)的直線關(guān)系
②要丈量或能查到百分吸收系數(shù)或吸收系數(shù)
③請(qǐng)求單色光,對(duì)儀器請(qǐng)求高
我們要經(jīng)常對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)和測(cè)試,以保證儀器工作在較佳狀態(tài),以下是關(guān)于薩斯派克分光光度計(jì)的日常維護(hù),望都能給大家參考:
一、溫度和濕度是影響薩斯派克分光光度計(jì)性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕,使金屬鏡面的光潔度下降,引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕,產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等,甚至儀器停止工作,從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正,薩斯派克分光光度計(jì)應(yīng)具備四季恒濕的儀器室,配置恒溫設(shè)備,特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也會(huì)影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開(kāi)關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性,也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔,保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件,防塵等。
三、薩斯派克分光光度計(jì)使用一定周期后,內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃,可以由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開(kāi)啟儀器外罩對(duì)薩斯派克分光光度計(jì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作,同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固,對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔,必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn),對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑,最后,恢復(fù)原狀,薩斯派克分光光度計(jì)再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校與記錄。
薩斯派克分光光度計(jì)分析法是基于不同分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)對(duì)電磁輻射選擇性吸收而建立的分析方法。薩斯派克分光光度計(jì)采用微處理機(jī)控制技術(shù),在可見(jiàn)光譜區(qū)域內(nèi)對(duì)物質(zhì)作定性、定量分析,是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室必備的多用途分析儀器,應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)境保護(hù)、質(zhì)量控制及大專(zhuān)院校教學(xué)實(shí)驗(yàn)室等部門(mén)。
薩斯派克分光光度計(jì)具有背光式LCD顯示屏,讀數(shù)清晰明暸,采用先進(jìn)的全息閃耀光柵C-T式單色器,具有波長(zhǎng)精度高,單色性好,雜散光低等優(yōu)點(diǎn),采用微機(jī)測(cè)量系統(tǒng),轉(zhuǎn)換精度高,并有自動(dòng)調(diào)整0%(T)和調(diào)整100%(T),濃度直讀、濃度因子設(shè)定,并可選擇串行數(shù)據(jù)打印機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)打印功能。薩斯派克分光光度計(jì)測(cè)量讀數(shù)準(zhǔn)確性高,重現(xiàn)性和穩(wěn)定性佳。
紫外分光光度計(jì)就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見(jiàn)光區(qū)任意選擇不同波長(zhǎng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)詳細(xì)操作流程及校準(zhǔn)方法: 一、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)光度測(cè)量 在模式選擇屏幕中選擇<1.Photometric光度>選項(xiàng),將顯示參數(shù)配置屏幕; 用GOTOWL鍵設(shè)定測(cè)量波長(zhǎng); 按F2鍵設(shè)定進(jìn)樣控制; 按START/STOP鍵時(shí),測(cè)量開(kāi)始,顯示測(cè)量屏幕; 如需做空白校正,應(yīng)在測(cè)量前先設(shè)置空白樣品,然后,按AUTO-ZERO鍵,將測(cè)量值置為OABS(100%); 二、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)校正 開(kāi)機(jī)預(yù)熱10分鐘足矣; 放入黑塊和標(biāo)樣(沒(méi)有的自己配),關(guān)閉蓋子; 校0; 把燈光對(duì)著黑塊,把透光度調(diào)0; 把燈光對(duì)標(biāo)樣,將吸光度調(diào)到100%; 三、參比溶液介紹 參比溶液又稱(chēng)空白溶液。測(cè)量時(shí)用作比較的、不含被測(cè)物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常,用參比溶液掃描的曲線應(yīng)是一條平坦的直線。有時(shí),基體中,雖不含被測(cè)物質(zhì),但含有別的物質(zhì),這時(shí)必須保證其不影響測(cè)試。經(jīng)常碰到的是試劑空白中含有被測(cè)物質(zhì),此時(shí)必須經(jīng)過(guò)純化將其除去。否則將影響測(cè)定結(jié)果?! ?i>四、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng) 1.開(kāi)機(jī)前應(yīng)先預(yù)熱15分鐘,然后開(kāi)機(jī)自檢; 2.濕度要控制在75%左右,溫度在5~30度之間; 3.儀器要穩(wěn)壓電源,接地要好。并且避免陽(yáng)光直接照射; 5.常見(jiàn)故障及處理方法: 光門(mén)不能完全關(guān)閉:修復(fù)光門(mén)部件,使其完全關(guān)閉; 透過(guò)率“100%”旋到底了。解決方法:重新調(diào)整“100%”旋鈕; 儀器嚴(yán)重受潮:可打開(kāi)光電管暗盒,用電吹風(fēng)吹上一會(huì)兒使其干燥,并更換干燥劑;以上為紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的具體操作方法及使用注意事項(xiàng),希望能給予您幫助。