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你知道液相色譜漏液原因與解決辦法嗎 液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題解決方法

時(shí)間:2020-07-24    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

液相色譜從開(kāi)始的流動(dòng)相瓶到結(jié)束的廢液瓶之間,其流通管路是全封閉的,雖然內(nèi)部壓力很高,但色譜儀的外部不會(huì)出現(xiàn)一滴液體。如果出現(xiàn)了漏液現(xiàn)象,系統(tǒng)一般會(huì)發(fā)出報(bào)錯(cuò)信號(hào),無(wú)法正常工作。對(duì)于操作人員來(lái)說(shuō),漏液是一件讓人苦惱的事情,因?yàn)橛行┞┮簡(jiǎn)栴}比較直觀,容易解決,但有些漏液?jiǎn)栴}比較復(fù)雜,需要深入排查。

 

一、接頭處漏液

 

接頭處漏液一般發(fā)生在色譜柱接頭處,此處的漏液現(xiàn)象比較直觀,一般是液體積流在色譜柱頭,造成壓力波動(dòng)。通??梢酝ㄟ^(guò)擰緊或更換管路接頭來(lái)解決漏液的問(wèn)題。但值得注意的是過(guò)份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過(guò)稍微擰緊接頭不能解決漏液的問(wèn)題,就必須將接頭取下,檢查是否損壞(例如,卡套損壞、密封表面有雜質(zhì));損壞的接頭應(yīng)該更換掉。

 

二、進(jìn)樣閥漏液

 

1、轉(zhuǎn)子密封圈磨損太厲害或者損壞,造成密封不嚴(yán)。拆下六通閥,檢查轉(zhuǎn)子密封圈,可單獨(dú)購(gòu)買(mǎi),根據(jù)說(shuō)明書(shū)自行安裝更換。如果定子磨損比較嚴(yán)重的話,有必要也需更換。

 

2、廢液管產(chǎn)生虹吸或者堵塞,造成廢液逆流。此時(shí)需要保持廢液管高于廢液液面,或者更換、疏通廢液管,保證廢液排放正常。

 

3、進(jìn)樣口密封松動(dòng)或者進(jìn)樣針頭尺寸不合適。需要調(diào)整進(jìn)樣口的密封圈或者更換合適的進(jìn)樣針頭。

 

三、泵漏液

 

泵頭漏液一般都是由于密封不好引起的,需要檢查相關(guān)接口處的密封狀況。

 

1、單向閥、接頭松動(dòng)。這是首先要排查的項(xiàng)目,但單向閥和接頭也不能擰得過(guò)緊,避免磨損。

 

2、柱塞桿磨損刮傷或者柱塞密封墊損壞導(dǎo)致的柱后漏液,這是zui常見(jiàn)的問(wèn)題,此情況一般會(huì)出現(xiàn)以下三種現(xiàn)象,一是柱塞桿磨損導(dǎo)致與密封圈之間有微小縫隙;二是柱塞桿與密封圈不匹配;三是泵頭緊固螺釘沒(méi)有擰緊。在確定擰緊的情況下,需要更換柱塞桿或柱塞密封墊。

 

3、比例閥損壞。首先檢查手緊接頭,如有損壞,則立即更換;再檢查隔膜,如果發(fā)現(xiàn)漏液則立即更換。

 

四、檢測(cè)器漏液

 

1、 流通池墊片損壞,造成漏液。在使用過(guò)程中避免過(guò)大的壓力,拆開(kāi)流通池,檢查墊片,損壞嚴(yán)重時(shí)需要更換墊片。

 

2、 廢液管破裂。在人為外力的作用下,廢液管受到擠壓造成破裂,打開(kāi)檢測(cè)池,檢查管路,如果破裂,需更換。

 

3、流通池阻塞。當(dāng)流通池阻塞時(shí),其內(nèi)部壓力升高,可能會(huì)造成池子窗口破裂,此時(shí)需要清洗流通池,有必要時(shí)需要更換流通池或者池子窗口。

 

 

 

 

  液相色譜柱是液相色譜的核心部件,它主要起到了分離作用。色譜柱同樣也是一個(gè)消耗品,在流動(dòng)相沖刷的過(guò)程和樣品在分析的過(guò)程,填料損失和污染使得色譜柱的性能慢慢下降。所以,對(duì)于液相色譜尤其是常用的C18柱,需要在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)其性能做一個(gè)評(píng)估,同樣,新的色譜柱也要對(duì)色譜柱做一個(gè)有效的體檢。

  液相色譜柱的十大常見(jiàn)故障:

  1、若操作過(guò)程發(fā)現(xiàn)壓力很小,則可能管件連接有漏,注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)誤警告(各組件指示燈均為紅色),一般為漏液,其中一個(gè)感應(yīng)器中已有溶劑,漏液故障排除后,擦干,點(diǎn)擊On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再點(diǎn)擊操作界面中的Instrument/System On即可。

  2、連接柱子與管線時(shí),應(yīng)注意擰緊螺絲的力度,過(guò)度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液,可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異,不要混用,必要時(shí)可使用PEEK管及活動(dòng)接頭;

  3、操作過(guò)程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高,則可能管路已堵,應(yīng)先卸下色譜柱,然后用分段排除法檢查,確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞,可用小流量流動(dòng)相或以小流量異丙醇沖洗,還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡),若還是無(wú)法通暢,則需換柱;

  4、運(yùn)行過(guò)程中自動(dòng)停泵,可能為壓力超過(guò)上限或流動(dòng)相用完;

  5、樣品瓶中樣品較少,自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針無(wú)法到達(dá)液面,可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣高度的辦法,注意設(shè)置時(shí)不要使進(jìn)樣針碰到瓶底,微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶;

  6、自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對(duì)準(zhǔn)時(shí),需重新定位。

  7、泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn),可能為柱塞桿密封圈問(wèn)題或seal wash墊圈問(wèn)題,需更換;

  8、基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲,可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)定或沒(méi)達(dá)到化學(xué)平衡(使其平衡,若用離子對(duì)試劑,在使用使需要足夠的時(shí)間和溶劑體積,色譜柱才能達(dá)到足夠的平衡),流動(dòng)相被污染(更換流動(dòng)相,清洗儲(chǔ)液器、過(guò)濾器,沖洗并重新平衡系統(tǒng)),色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類(lèi)的被證明性能好的色譜柱),檢測(cè)器不穩(wěn)定;

  9、短期有規(guī)則的噪聲,可能原因?yàn)楸脡翰环€(wěn)或泵脈沖,調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)(如兩種溶劑的互溶性問(wèn)題),泵入口管路松或堵塞,泵太臟,泵柱塞磨損,檢測(cè)器不穩(wěn)定;

  10、長(zhǎng)期有規(guī)則噪聲,可能原因?yàn)槭覝夭环€(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當(dāng);

  保留時(shí)間是指溶質(zhì)通過(guò)色譜柱所需時(shí)間,即待測(cè)組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰大值所需的時(shí)間。保留時(shí)間是由色譜過(guò)程中的熱力學(xué)因素所決定,在一定的色譜操作條件下,任何一種物質(zhì)都有一確定的保留時(shí)間,有著類(lèi)似于比移值相同的作用,可作為色譜定性分析的依據(jù)。換言之,如果保留時(shí)間出現(xiàn)漂移問(wèn)題,那么檢測(cè)結(jié)果也會(huì)隨之受到影響。
 
  保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志,同一種東西,兩次的保留時(shí)間相差不要超過(guò)15s,超過(guò)了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移,就無(wú)法進(jìn)行定性。這里小編就列舉幾個(gè)保留時(shí)間漂移的的原因和解決方法。
 
  1色譜柱平衡
 
  如果觀察到保留時(shí)間漂移,首先應(yīng)考慮色譜柱是否已經(jīng)平衡。在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。通常平衡需要10~20個(gè)柱體積的流動(dòng)相,但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑(如離子對(duì)試劑)則需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,從而造成保留時(shí)間的漂移。應(yīng)注意:水是很容易污染的流動(dòng)相成分。
 
  2固定相穩(wěn)定性
 
  固定相的穩(wěn)定性都是有限的,即使在推薦的pH范圍內(nèi)使用,固定相也會(huì)慢慢水解。例如,硅膠基質(zhì)在pH4時(shí)水解穩(wěn)定性好,水解速度與流動(dòng)相類(lèi)型和配體有關(guān)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定;長(zhǎng)鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定;烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。經(jīng)常清洗色譜柱亦會(huì)加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解,如氨基鍵合相等。
 
  3色譜柱污染
 
  保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見(jiàn)原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過(guò)濾器,它可以過(guò)濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是:流動(dòng)相本身,流動(dòng)相容器,連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊,以及樣品等。通常通過(guò)實(shí)驗(yàn)可判斷污染的來(lái)源。樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分,就可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質(zhì),如:配藥中的賦形劑,生化樣品(如血清)中的蛋白及類(lèi)脂類(lèi)化合物,食品樣品中的淀粉,環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量,在此情況下,保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì)有反壓的增加,可以通過(guò)使用固相提取( SPE)等樣品前處理方法來(lái)去除樣品基質(zhì)的影響,避免色譜柱污染簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。相比之下,找到問(wèn)題的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑,但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解, DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。
 
  4流動(dòng)相組成
 
  流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等,應(yīng)防止流動(dòng)相由于蒸發(fā)、反應(yīng)等等原因造成的變化。
 


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