說到混合型液相色譜柱,它是一種能夠發(fā)生多種相互作用模式的色譜柱,作為色譜分離的核心,在目前的液相色譜分析中發(fā)揮著重要的作用?;旌夏J降纳V柱也是種類繁多,有雙重混合模式的,也有三重混合模式的。雙重混合模式包括:反相+陽離子交換,反相+陰離子交換,反相+HILIC等。三重混合模式包括:反相+陽離子交換+陰離子交換,HILIC+陽離子交換+陰離子交換等。
混合模式色譜柱由于其多種優(yōu)點,實驗人員在分離復雜樣品時,越來越多的被使用到實驗中,賽默飛擁有的三重混合模式Trinity系列色譜柱在單次運行中可同時分離離子和疏水性分析物,消除了更換色譜柱,使用離子對或使用多種色譜填料的需要。
來來來
我們來隆重介紹一下Acclaim Trinity系列色譜柱。Acclaim Trinity系列均為三重混合模式的色譜柱。又分為P和Q兩個系列,均采用納米微球-硅膠雜化技術,一個顆粒上集成了三種分離模式。P系列色譜柱可以同時分離陽離子、陰離子和非極性化合物。Q系列先賣個關子~
圖1. 納米微球-硅膠雜化技術
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新型Nanopolymer Silica Hybrid(NSH)技術在對以下物質分離時可以獲得無可比擬的色譜性能:
01 | 原料藥和反離子 |
02 | 藥物反離子的篩選 |
03 | 酸性和堿性原料藥及各自反離子的混合物 |
04 | 酸性、堿性和中性原料藥的混合物 |
圖2. Trinity P1柱和Trinity P2柱對比
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使用與維護
當次使用新的色譜柱時,在進行任何進樣之前,應采用流動相進行徹底沖洗(例如,在推薦的流速,大約使用 20 柱體積)。
當切換到新的流動相時, 確保新的流動相與色譜柱中以前的流動相相容,以避免由于沉淀造成色譜柱堵塞。在進行任何進樣(例如 20 個柱體積)之前,應完全調節(jié)色譜柱。
使用色譜柱前,需要把系統(tǒng)里置換為含有鹽的水相和有機相。保證色譜柱一直在帶有緩沖鹽的體系下使用,是對色譜柱較好的維護。
色譜柱清洗
對于磷酸鹽緩沖液中使用的 3.0 mm 內徑色譜柱:
1
在 0.3 mL/min 流速時,使用 5 個柱體積的 20 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色譜柱。
2
在 0.3 mL/min 流速時,使用 20 個柱體積的 100 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 90/10 清洗色譜柱(以強力清除滯留的離子物)。
3
在 0.3 mL/min 流速時,使用 5 個柱體積的 10 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色譜柱。
4
在 0.3 mL/min 流速時,使用 20 個柱體積的 10 mM 磷酸鈉(或鉀)緩沖液, pH 值 6.4 / 乙腈 v/v 20/80 清洗色譜柱(以強力清除滯留的疏水污染物)。
5
使用至少 20 個柱體積流動相平衡色譜柱。
典型應用
圖3. Trinity P1柱分析氯酸鹽和高氯酸鹽
圖4.Trinity P1同時分離藥物反離子
圖5.Trinity P2柱分析藥物相關陰離子和陽離子
您在日常的實驗過程中用的色譜柱有沒有壽命過短的問題?不但實驗成本攀升,實驗效果都沒法保證。我們今天就邀請月旭科技的工程師來為您解答有關色譜柱使用壽命的相關問題,助您的柱子“益壽延年”!
為什么檢測該項目使用不同品牌的色譜柱,壽命均在100針左右?
1)有可能的原因是樣品組分吸附在色譜柱的前段。可能是由于樣品在流動相中的溶解度低而沉淀出來的,也有可能是強吸附,或是樣品本身與填料表面發(fā)生微弱的不可預知的化學反應。樣品溶液本身的pH值在色譜柱的耐受臨界值附近,而且進樣體積較大(內徑4.6mm,上樣體積在50ul以上)對柱頭端的填料影響比較大,通常這樣的情況伴隨柱壓升高。
解決方法:選擇合適的樣品前處理技術,去除掉強保留物質。使用保護柱,盡量選擇與分析柱同種填料,同種鍵合方法的保護柱。如果使用不同品牌的填料、裝填工藝的保護柱,在分離能力和保護分析柱方面可能得不到好的效果。也不要使用更大粒徑的保護柱,更大粒徑或者裝填較差的保護柱會因為它的峰展寬作用而導致分離能力下降。
2)鍵合相脫落變性。色譜條件多方作用導致壽命短,這是目前的色譜技術不能解決的,一般情況下小基團鍵合相更容易被水解而脫落。流動相中鹽濃度越高,越容易引起水解。這種情況下,就只能重新開發(fā)色譜條件。
為什么該品牌的色譜柱一直很好,就這一支壽命異常短?
確定一下使用頻率、沖洗頻率、流動相的更換頻率、流動相的試劑品牌、純度等是否和之前一樣,如果有更換,那壽命有差異是正常現(xiàn)象。如果都與之前相當,那需要檢查這支色譜柱是否受過劇烈震蕩,比如:不小心摔過,或者運輸過程中受過劇烈震蕩,建議與廠家的技術人員溝通。
為什么使用該品牌的支色譜柱用于方法建立時壽命長,方法建立后,開始進行方法驗證時,卻覺得壽命短?
這種情況的發(fā)生,很大的原因是,前期建立方法時,并不是連續(xù)做項目,而是不停地更換流動相。這就意味著色譜柱的沖洗頻率比較高,而更換的流動相的清潔度也是比較好的。建立方法的時候很難連續(xù)進樣多次,有時候甚至一周才做一次項目,這樣就會產生支柱子使用時間更久的錯覺。而方法建立后,做方法驗證,流動相固定下來,就會一次性配置較大體積的流動相,這樣流動相較易變質,有時肉眼不能直接分辨。而且會連續(xù)多次過夜進樣,這樣對色譜柱的沖洗也不是很及時。這些都是可能導致色譜柱壽命變短的因素。