三聚氰胺即蜜胺，又稱氰尿酰胺，是一種白色晶體，含氮量高達(dá)66.7%，在食品和飼料中添加三聚氰胺，可以提高含氮量，冒充成高蛋白食品，從而大幅度降低成本。目前，測定粗蛋白的含量常用凱氏定氮法，而凱氏定氮法只能測出含氮量而無法測出氮的來源。從而造成如2007年美國寵物食品污染事件和2008年中國毒奶粉事件等嚴(yán)重的食物安全事故。調(diào)查顯示，不法商販在漁用飼料原料魚粉中添加三聚氰胺，以次充好謀求利潤，一旦用此類原料制造出來的飼料，必然可以檢出三聚氰胺，但含量均不高。
農(nóng)業(yè)部已命令禁止在飼料中人為添加三聚氰胺。2009年6月8日起農(nóng)業(yè)部發(fā)布第1218號(hào)公告，將飼料原料和飼料產(chǎn)品中三聚氰胺限量值定為2.5mg/kg。目前飼料中三聚氰胺殘留的檢測方法主要是氣相色譜法、液相色譜法和質(zhì)譜法。國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1372-2007《飼料中三聚氰胺的測定》中采用液相色譜法和氣質(zhì)聯(lián)用法檢測飼料中的三聚氰胺含量，檢測限分別達(dá)到2和0.05mg/kg?？紤]到由于質(zhì)譜法檢測設(shè)備昂貴，色譜法更具普及性。由于漁用飼料中三聚氰胺的含量不公開，且飼料中的雜質(zhì)成分復(fù)雜，所以要求檢測方法有更高的靈敏度和更好的穩(wěn)定性。根據(jù)國家對于飼料中三聚氰胺的限量要求，研究采用離子交換分離柱-液相色譜法測定漁用飼料中的三聚氰胺的方法，該方法簡便，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
儀器準(zhǔn)備
儀器簡介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺(tái)P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測器及恒溫柱箱等，實(shí)行多元高壓洗脫、波長掃描等功能。
應(yīng)用領(lǐng)域
化合物檢測、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
色譜條件：
色譜柱 | 陽離子交換柱（SCX）， 250mm×4.6mm （內(nèi)徑），粒度5μm |
流動(dòng)相 | 磷酸二氫鉀（50mmol/LpH=4.6）+乙腈=70:30 |
流速 | 1mL/min |
檢測波長 | 240nm |
柱溫 | 35℃ |
進(jìn)樣量 | 20μL |
譜圖分析：
1.進(jìn)樣系統(tǒng)
一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
2.輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47～4.4X107Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。
3.分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm(需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管)，內(nèi)徑為2～5mm，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成).固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。
另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C，通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率。
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