高效液相色譜儀作為實(shí)驗(yàn)室常用的分析型儀器，上手比較快，但有五個操作細(xì)節(jié)容易被忽略。即使是經(jīng)驗(yàn)豐富的老分析員也會犯錯誤，導(dǎo)致一些儀器故障。
1、高效液相色譜儀流動相不過濾
因?yàn)閴m埃或其它雜質(zhì)會磨損柱塞、密封圈和單向閥，因此流動相預(yù)先用0.2um或0.45um濾膜過濾后再使用。流動相的溶劑濾頭要不定期清洗或更換。
2、高效液相色譜儀使用后沒有及時清洗
流動相中不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖鹽的不應(yīng)留在高效液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)，由于蒸發(fā)或漏液，可能造成鹽類晶體析出，會堵塞密封圈和單向閥。
3、高效液相色譜儀流動相走空
泵工作時要防止流動相走空，否則泵空轉(zhuǎn)也會磨損柱塞桿和密封圈，造成漏液故障。
4、高效液相色譜儀沒有流動相流出，有無壓力
可能是泵內(nèi)有空氣，需要先排空，或使用注射器針筒抽出液體，還有可能性是密封圈磨損，需更換。
5、高效液相色譜儀壓力和流量不穩(wěn)
可能是有氣泡，或者是單向閥內(nèi)有異物，需要卸下單向閥，放在10%甲醇水，或者異丙醇超聲后再使用。
作為高效液相色譜儀的操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)液相的說明書，熟練掌握軟件和硬件的操作，日常的維修，能夠獨(dú)立排除最基礎(chǔ)的故障并且維修。這樣才能延長高效液相色譜儀的使用壽命和工作品質(zhì)。
通用（深圳）儀器有限公司是一家專門從事液相色譜儀研發(fā)，設(shè)計(jì)，生產(chǎn)與銷售的技術(shù)企業(yè)，具有強(qiáng)大的研發(fā)及工程技術(shù)實(shí)力。產(chǎn)品有液相色譜、離子色譜儀、原子熒光光譜儀、血藥濃度分析儀，液相色譜的相關(guān)單元部件。想了解更多儀器設(shè)備，歡迎咨詢
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。
②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/p>
③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
?、荼苊鈱⒒|(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
?、藿?jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。
?、弑４嫔V柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過晚上或更長時間。
?、嗌V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護(hù)、延長柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會損失一定的柱效，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補(bǔ)加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后，可以用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機(jī)沖洗15分鐘。
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