液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成,其中液相色譜柱的正確安裝和使用,是液相色譜工作的關(guān)鍵;也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。
色譜柱的安裝:
1.將液相色譜裝置中的流動相完全置換后再連接色譜柱,并完全排出流路內(nèi)的空氣。裝置內(nèi)的液體和所使用的流動相不能相溶的情況下,使用雙方都能相溶的液體做過渡。。將鹽溶液置換成有機溶劑的時候,需要通過純水、丙酮的順序來進行置換。相反,從有機溶劑轉(zhuǎn)換成鹽溶液的情況下,需要通過丙酮、純水的順序置換。
2.色譜柱保存方法不對或者長期不使用的情況下,色譜柱的出入口可能會有空氣殘留。這種情況下,必須先把空氣完全排出后才連接到裝置中。避免快速加熱,加熱溫度不要超過色譜柱的Z高負荷溫度。把柱子入口側(cè)的螺栓打開,然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了),等液體滿出來以后接到裝置上。然后,打開出口處的螺栓,用泵送液,等確認出口處有液體流出后,連接到裝置中。這樣操作,就算后面再連接一根色譜柱也能完全除去空氣。
3.在泵運作的時候連接色譜柱。確保能讓流動相按照色譜柱上箭頭的方向流動的狀態(tài)連接色譜柱。
4.色譜柱加溫使用的時候,先用0.2~0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達到所定溫度后,再漸漸的增加流量至測定流量。
色譜柱的安裝:
1)將液相色譜裝置中的流動相完全置換后再連接色譜柱,并完全排出流路內(nèi)的空氣。
裝置內(nèi)的液體和所使用的流動相不能相溶的情況下,使用雙方都能相溶的液體做過渡。比如從水置換到氯仿的情況,就需要使用丙酮做過渡,才能完全置換。
將鹽溶液置換成有機溶劑的時候,需要通過純水、丙酮的順序來進行置換。相反,從有機溶劑轉(zhuǎn)換成鹽溶液的情況下,需要通過丙酮、純水的順序置換。
不僅僅是泵,流動相流動的所有流路都必須進行置換。例如,注入樣品的情況,軟管內(nèi)的液體也需要置換。另外,如果使用壓力計等別的軟管的情況,取下來的管子也必須由流動相洗凈后才能繼續(xù)使用。
2)色譜柱保存方法不對或者長期不使用的情況下,色譜柱的出入口可能會有空氣殘留。這種情況下,必須先把空氣完全排出后才連接到裝置中。
避免快速加熱,加熱溫度不要超過色譜柱的最高負荷溫度。
把柱子入口側(cè)的螺栓打開,然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了),等液體滿出來以后接到裝置上。然后,打開出口處的螺栓,用泵送液,等確認出口處有液體流出后,連接到裝置中。這樣操作,就算后面再連接一根色譜柱也能完全除去空氣。
3)在泵運作的時候連接色譜柱。確保能讓流動相按照色譜柱上箭頭的方向流動的狀態(tài)連接色譜柱。
4)色譜柱加溫使用的時候,先用0.2~0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達到所定溫度后,再漸漸的增加流量至測定流量。
5)色譜柱需要安定時間。連接到裝置中立即進行測試的情況下,第一次很難得到好的分析結(jié)果。
陽離子色譜柱是高效液相色譜的一種,是分析陰陽離子的一種液相色譜方法,該方法具有選擇性好、靈敏、快速、簡便等優(yōu)點,并且可以同時測定多種組分。
陽離子色譜柱的進樣系統(tǒng)
離子色譜的進樣主要分為3種類型:即氣動、手動和自動進樣方式。
手動進樣閥
手動進樣采用六通閥,其工作原理與HPLC相同,但其進樣量比HPLC要大,一般為50μL。樣品首先以低壓狀態(tài)布滿定量管,當閥沿順時針方向旋至另一位置時,即將貯存于定量管中固定體積的樣品送進分離系統(tǒng)。
氣動進樣閥
氣動閥采用一定氦氣或氮氣氣壓作動力,通過兩路四通加載定量管后,進行取樣和進樣,它有效地減少了手動進樣因動作不同所帶來的誤差。
自動進樣
自動進樣器是在色譜工作站控制下,自動進行取樣、進樣、清洗等一系列操縱,操縱者只須將樣品按順序裝進貯樣機中。圓盤式自動進樣的工作步驟如下:
(1)電機帶動貯樣盤旋轉(zhuǎn),待分析樣品置于取樣針正下方。
(2)電機正轉(zhuǎn),絲桿帶動滑塊向下移,把取樣針插進樣品塑料蓋,滑塊繼續(xù)下移,將瓶蓋推進瓶內(nèi),在瓶蓋擠壓下樣品經(jīng)管道流進進樣閥定量管,完成取樣動作。
(3)進樣閥切換,完成進樣。
(4)電機反轉(zhuǎn),絲桿帶動滑塊上移,取樣針恢復原位。
自動進樣可以達到很寬的樣品進樣量范圍的目的。