1、基線波動(dòng)的原因？

    基線波動(dòng)有可能與實(shí)驗(yàn)室的溫度及濕度變化有關(guān)系。需確保室溫及濕度穩(wěn)定，將安捷倫液相色譜儀從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管進(jìn)行隔熱保溫。

    2、安捷倫液相色譜儀-什么原因?qū)е禄€毛刺？

    這很有可能是流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。請(qǐng)先停泵來進(jìn)行確認(rèn),如果毛剌消失，則很有可能是由于流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動(dòng)池。如果毛剌仍然存在，則需檢查檢測(cè)器本身的電噪音有關(guān)。

    3、如何減少基線噪音？

    無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請(qǐng)沖洗色譜柱，對(duì)樣品做合適的前處理以避免污染，并使用HPLC級(jí)別的溶劑。連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成。要確定問題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵，請(qǐng)先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測(cè)基線。如果此時(shí)基線平穩(wěn)，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用ChemStation在線診斷或LC手持控制器檢查泵方面的故障。如果停泵后噪音繼續(xù)存在，則說明噪音與檢測(cè)器有關(guān)。首先，請(qǐng)嘗試更換燈。如果問題依然存在，則請(qǐng)廠家聯(lián)系聯(lián)系。

    4、如何避免液相基線飄移？

    基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染。請(qǐng)沖洗色譜柱，凈化樣品，然后使用新溶劑。向下飄移通常是由于檢測(cè)室或柱箱中的溫度波動(dòng)的原因。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是HPLC級(jí)別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。

    5、如何排除流動(dòng)相/流動(dòng)池中的氣泡？

    避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測(cè)器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動(dòng)池中的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池的最大壓力，否則會(huì)造成流動(dòng)池漏液或流動(dòng)池?fù)p壞。如果流動(dòng)池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動(dòng)相接入檢測(cè)器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動(dòng)池。直到基線上看不到尖峰為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了。

? 與液相色譜柱的性能相關(guān)的因素很多，基質(zhì)（matrix）或者說擔(dān)體、載體的化學(xué)性質(zhì)、鍵合相（固定液）的化學(xué)性質(zhì)、填料形狀大小粒度分布、碳量和鍵合度等等。

　　色譜柱填料可以由基質(zhì)直接構(gòu)成，如硅膠、氧化鋁、高交聯(lián)度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等等；也可以在這些基質(zhì)的基礎(chǔ)上涂布或化學(xué)鍵合固定液來構(gòu)成，如：經(jīng)典的各種ODS柱、氨基柱、氰基柱等。

一、基質(zhì)的特點(diǎn)：

1、 硅膠

　　硅膠是陶瓷性質(zhì)的無機(jī)物基質(zhì)，剛性大，不易變形?；瘜W(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，但對(duì)于水溶液尤其堿性水溶液仍然是不穩(wěn)定的，即使表面經(jīng)過良好的化學(xué)鍵合，覆蓋了固定液，還是要注意水、堿性溶液、酸性溶液對(duì)硅膠的溶解作用，基質(zhì)或者說是柱床（packed bed）溶解對(duì)色譜柱的影響是致命的。以硅膠為基質(zhì)的填料構(gòu)成了目前絕大多數(shù)的色譜柱填料。純硅膠填料適宜分離溶于有機(jī)溶劑的極性、弱極性的非強(qiáng)離解型的化合物，硅膠也可以做凝膠色譜但柱效較低。硅膠基質(zhì)鍵合固定相的高壓液相填料，有其他填料無法比擬的高分離效能。

2、 二氧化鋁

　　二氧化鋁和硅膠相似，但對(duì)水溶液、酸性堿性水溶液溶液更加不穩(wěn)定。所以，極少用作鍵合固定相的基質(zhì)，也是適宜分離溶于有機(jī)溶劑的極性、弱極性的非強(qiáng)離解型的化合物，尤其是分離芳香族碳?xì)浠衔?。酸性易離解的化合物容易在二氧化鋁上形成死吸附。另外，氧化鋁分離幾何異構(gòu)體能力優(yōu)于硅膠。

3、 聚合物填料

　　聚合物基質(zhì)受壓會(huì)變形，壓力限度低但pH使用范圍寬。苯乙烯-二乙烯苯基質(zhì)疏水性強(qiáng)，使用任何流動(dòng)相，在整個(gè)pH范圍內(nèi)穩(wěn)定，可以用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿來清洗色譜柱。甲基丙烯酸酯基質(zhì)比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更強(qiáng)，但可以通過適當(dāng)?shù)墓δ芑揎椬兂捎H水性的。由于不耐壓、有溶脹性，所以聚合物填料適宜用于大分子像蛋白質(zhì)或合成的高聚物，另外還可以制成分子排阻、離子交換柱。近年發(fā)展迅速的大孔樹脂，實(shí)際上主體就是苯乙烯-二乙烯苯聚合物或類似的合成高聚物。

　　由于硅膠基質(zhì)的絕對(duì)地位，以下主要以硅膠為例。

二、形狀大小粒度分布

　　基質(zhì)要成為填料，首先要制成合適的形狀和大小。硅膠形狀有：薄殼型、無定形全多孔、球形全多孔，另外還有先做成微珠再堆積成球形全多孔的。通常只說不定形、球形。無定形全多孔的填料容易制備、價(jià)格低、粒度分布較均勻，但渦流擴(kuò)散大，滲透性差，比較難填裝出穩(wěn)定的柱床，一般用來做制備柱。球形全多孔填料渦流擴(kuò)散小，滲透性好；如果是硅膠先做成珠子再堆積而成的話，具有傳質(zhì)阻抗小、載樣量大的優(yōu)點(diǎn)，柱效也更高。球形填料外形對(duì)稱，比較容易填出穩(wěn)定的柱床。填料的大小一般不能直接測(cè)量，因?yàn)樘盍狭６扔幸欢ǚ植挤秶?，一般給出的大小只是用一定方法測(cè)得的表觀大小。填料大小與柱效、柱壓的關(guān)系為：柱效與填料大小成反比，柱壓與填料大小的二次方成正比。所以，快速分析柱使用3微米粒度的填料、一般做成5厘米長，就是為了降低柱壓；需要注意到降低粒度所得到的柱效增加跟不上柱壓的增加快。