在選擇各種儀器時，都有一定的標(biāo)準(zhǔn)，如測量精度、或者測量范圍。而在選擇紫外分光光度計時，我們考慮的是光學(xué)構(gòu)造、光譜范圍、樣品類型和分析工具。
光學(xué)構(gòu)造主要是指紫外分光光度計給出的光是單光束還是雙光束。
單光束是通過單束光進(jìn)行測量，在測量過程中給定波長，然后通過被測物和對照物得到吸光結(jié)果。而雙光束是通過一個斬光輪將光束一分為二。
光源包括紅外線、紫外線和可見光。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計通常使用光電倍增管和光敏二極管來測量吸光值。
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
大部分單機(jī)型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。
高性能的儀器，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。
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目前,紫外可見分光光度計的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。最主要的是以下5個方面。
1.蛋白質(zhì)分析工作中
紫外可見分光光度計在蛋白質(zhì)的分析中,最主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm,所以,采用光度測量模式,將儀器的波長GOTO到蛋白質(zhì)的最大吸收峰波長280nm上,測試其吸光度大小,就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
2.核酸分析工作中
紫外可見分光光度計在核酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對核酸的定量檢測;因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計的波長GOTO到核酸的最大吸收峰260nm上,測試其吸光度大小就是了。
3.氨基酸分析工作中
紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應(yīng)用,主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到氨基酸的最大吸收峰230nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出氨基酸的含量。但是,因為氨基酸分析時,一般是將它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干擾吸收線,所以,在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時,要注意防止干擾的問題。此外,還需注意:只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收,多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱,測定時要衍生化后再測。
4.糖類分析測試工作中
紫外可見分光光度計在糖的分析中,主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm,所以,對糖類進(jìn)行分析時,只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到氨基酸的最大吸收峰218nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出糖的含量。
5.多糖分析測試工作中
紫外可見分光光度計在多糖的分析中,主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到多糖的最大吸收峰206nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因為,在206nm處的時候,光源(氘燈)的能量已經(jīng)很弱,儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低,光電倍增管的靈敏度也很低,206nm左右的干擾也很大。所以,用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事,目前許多科學(xué)家正在研究中。
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