菌落計數(shù)器有手動計數(shù)與自動計數(shù)二種選擇。其中的手動計數(shù)器因費時又費力所以逐漸的被市場淘汰,取而代之的就是全自動計數(shù)器。全自動菌落計數(shù)儀因其使用的自動化程度高、分析結(jié)果可核對、樣品信息可留存等,已逐漸被越來越多的科研院所、衛(wèi)生疾控部分所喜愛。如何選型,才能獲得性能卓越的菌落計數(shù)儀,并取得高性價比呢?這得從該類儀器的原理來解釋?,F(xiàn)今面市的所有全自動菌落計數(shù)儀均是采用成像分析法實現(xiàn)自動計數(shù)的,即由成像硬件+分析軟件所組成,這二塊內(nèi)容的任何一塊上出現(xiàn)失分,都會嚴重影響計數(shù)分析結(jié)果的穩(wěn)定性。 成像硬件的選型 成像硬件用于獲得清晰有效的菌落圖像,以便分析計數(shù)?,F(xiàn)今的成像硬件有拍照成像的、掃描成像的。由攝像頭拍照成像的優(yōu)點是:成像速度快,能確保在0.5秒內(nèi)獲得菌落圖像。由單反相機、卡片機拍照成像的優(yōu)點是:能自動對焦、且像素分辨率一般更高,但其成像需要3~4秒的時間。然而,拍照成像的致命弱點是:成像環(huán)境中的光線強度,無論是暗視野,還是背光,想要做到圖像中心與邊緣保持完全一致,是不可能的。從而引起平皿上亮度的不一致,這就嚴重干擾了菌落目標的自動識別。因此,如果要選購拍照成像的,其分析軟件就一定要具有背景矯正功能,以便自動改善成像的效果。掃描成像與在燈箱中營造均勻面光源不同,是將線光源通過移動變成面光源的,因此光線強度非常均勻,其均勻度通常比拍照燈箱的面光源要高一個數(shù)量級,從成像硬件的根本上解決了菌落目標的亮度不勻問題,因此計數(shù)分析非常穩(wěn)定。目前,以300dpi分辨率(3482×2396像素成像)掃描6個90mm直徑平皿的速度,暗視野成像約12秒、背光成像約20秒,就其成像速度而言,與單反相機、卡片機拍照成像的速度相當。由于掃描成像的光線均勻度遠遠高于拍照成像,為獲得高質(zhì)量的成像效果,以便實現(xiàn)“傻瓜式”分析。掃描成像的另一優(yōu)點是:成像分辨率可調(diào),單平皿成像最高可達4800dpi(即:25.4/4800=0.00529mm/像素),是任何拍照成像遠不及的。可以預期:掃描成像將很快成為主流選擇。 分析軟件的選型 分析軟件是全自動菌落計數(shù)儀的另一塊核心成分。因為菌落生物的存在多樣性,在培養(yǎng)基上的表現(xiàn)或顯像不可能大體一致,針對這類變化,在分析軟件選型上要考慮:對于各類成像干擾的自動排除能力。比如:是否能自動矯正背景,等等。另外,對于嚴重粘連在一起的團裝、鏈狀分布菌落,將其自動分割開來的水平,也是評價分析軟件的考量指標。尤其是:對于同類菌落的“一鍵”化的智能分類計數(shù)能力,以及對于菌落計數(shù)分類的自動識別學習能力,更是評價分析軟件的關(guān)鍵考量指標。現(xiàn)在比較好的分析軟件,還集成了對6個90mm直徑平皿的抑菌圈全自動測量功能,以及對抗生素效價分析、藥敏分析功能,可避免用戶重復購置成像用的硬件。一般分析軟件都具應具備對于分析結(jié)果和標記圖像的保存、查看功能。 精準、穩(wěn)定的傻瓜式操作 全自動菌落計數(shù)儀就是為了減輕工作人員工作強度的,在現(xiàn)今的高技術(shù)下,若還需要估算才能測出菌落數(shù)的話,應是比較落后了。可以的是:能“不變應變”精準、穩(wěn)定地傻瓜式操作的分析軟件,其對于菌落形態(tài)和樣品狀態(tài)的不確定性,能夠自動適應,以避免不斷地調(diào)節(jié)菌落分割參數(shù),其較多由對話交互來擦除那些個污染部分,即可。
菌落計數(shù)器由計數(shù)器、探筆、計數(shù)池等部分組成,計數(shù)器采用CMOS集成電路精心設(shè)計,LED數(shù)碼管顯示,字高13mm,清晰明亮,配合專用探筆,計數(shù)靈敏準確,菌落對比清楚。便于觀察。可廣泛用于食品、飲料、藥品、生物制品、化妝品、衛(wèi)生用品、飲用水、生活污水、工業(yè)廢水、臨床標本中細菌數(shù)的檢驗。那么菌落計數(shù)器都是怎樣進行計數(shù)的呢?上海巴玖來為您詳細講解菌落計數(shù)器的計數(shù)方法。
1.計數(shù)器測定法
即用血細胞計數(shù)器進行計數(shù)。取一定體積的樣品細胞懸液置于血細胞計數(shù)器的計數(shù)室內(nèi),用顯微鏡觀察計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的(O.1mm3),因而根據(jù)計數(shù)器刻度內(nèi)的細菌數(shù),可計算樣品中的含菌數(shù)。本法簡便易行,可立即得出結(jié)果(本法不僅適于細菌計數(shù),也適用于酵母菌及霉菌孢子計數(shù))。
2.電子計數(shù)器計數(shù)法
電子計數(shù)器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化,小孔僅能通過一個細胞,當一個細胞通過這個小孔時,電阻明顯增加,形成一個脈沖,自動記錄在電子記錄裝置上。
該法測定結(jié)果較準確,但它只識別顆粒大小,而不能區(qū)分是否為細菌。因此,要求菌懸液中不含任何碎片。
3.活細胞計數(shù)法
常用的有平板菌落計數(shù)法,是根據(jù)每個活的細菌能長出一個菌落的原理設(shè)計的。取一定容量的菌懸液,作一系列的倍比稀釋,然后將定量的稀釋液進行平板,根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù),可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高,是一種檢測污染活菌數(shù)的方法,也是目前國際上許多國家所采用的方法。使用該法應注意:①一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進行計數(shù),過多或過少均不準確;②為了防止菌落蔓延,影響計數(shù),可在培養(yǎng)基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
廣泛應用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細菌檢驗,是常用的活菌計數(shù)法。
4.比濁法
比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測定細菌的數(shù)量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比,與光密度成正比,所以,可用光電比色計測定菌液,用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。
此法簡便快捷,但只能檢測含有大量細菌的懸浮液,得出相對的細菌數(shù)目,對顏色太深的樣品,不能用此法測定。
5.測定細胞重量法
此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進行稱重;干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后,以清水洗凈放人干燥器加熱烘干,使之失去水分然后稱重。此法適于菌體濃度較高的樣品,是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。
6.測定細胞總氮量或總碳量
氮、碳是細胞的主要成分,含量較穩(wěn)定,測定氮、碳的含量可以推知細胞的質(zhì)量。此法適于細胞濃度較高的樣品。
7、顏色改變單位法(colour change unit,簡稱CCU)
這種方法通常用于很小,用一般的比濁法無法計數(shù)的微生物,比如支原體等,因為支原體的液體培養(yǎng)物是完全透明的,呈現(xiàn)為清亮透明紅色,因此無法用比濁法來計數(shù),由于支原體固體培養(yǎng)很困難,用cfu法也不容易計數(shù),因此需要用特殊的計數(shù)方法,即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標,來計數(shù)微生物的相對含量的。
菌落計數(shù)器使用方法:
1將電源插頭插入實驗室220伏電源插座內(nèi)。
2.將探筆插頭插入儀器上的探筆插孔內(nèi)。
3.將電源開關(guān)撥向“開”,計數(shù)池內(nèi)燈亮。同時顯示窗內(nèi)顯示明亮的“000”,表示允許進行計數(shù)。
4.將待檢的培養(yǎng)皿,皿底朝上放入計數(shù)池內(nèi)。
5.用探筆在培養(yǎng)底面對所有的菌落逐個點數(shù)。此時,菌落處被抹上顏色,顯示窗內(nèi)數(shù)字自動累加。
6.用放大鏡仔細檢查,確認點數(shù)無遺漏,計數(shù)即已完畢。
7.顯示窗內(nèi)的數(shù)字即為該培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
8.記錄數(shù)字后取出培養(yǎng)皿,按“復0”按鈕,顯示恢復“000”。為另一培養(yǎng)皿的計數(shù)做好準備。
菌落計數(shù)器注意事項:
1.儀器應放置在平整牢固的試驗臺上使用。
2.點數(shù)菌落時,探筆不要過于傾斜,輕輕點下至有彈跳感時,數(shù)字即被輸入。
3.儀器應防潮,放劇烈震動,防直接日光曝曬防酸堿侵蝕。用后應加防塵罩。
4.注意防止細菌培養(yǎng)物污染計數(shù)池。
5.儀器及探筆均不能隨意拆卸。若發(fā)現(xiàn)故障,應請有經(jīng)驗的技術(shù)人員檢修。
菌落計數(shù)是微生物實驗中比較普遍的實驗之一,菌落計數(shù)器利用圖像采集器采集圖像,通過計算機對圖像進行分析,自動計數(shù)和測量細菌在固體培養(yǎng)基上生長而形成的肉眼可見的菌落或菌斑,是統(tǒng)計物品含菌數(shù)的有效方法,廣泛用于食品、飲料、藥品、生物制品、化妝品、衛(wèi)生用品、飲用水、生活污水、工業(yè)廢水、臨床標本中細菌數(shù)的檢驗。
菌落計數(shù)器的使用:
1、將電源插頭插入220伏電源插座內(nèi)。
2、將計數(shù)筆插頭插入儀器上的插孔內(nèi)。
3、將電源開關(guān)撥向“開”,計數(shù)池內(nèi)燈亮,同時數(shù)字顯示應為“000”,表示允許進行計數(shù)。如數(shù)字不為“000”,應按復零鍵
4、將待檢的培養(yǎng)皿(皿底朝上),放入計數(shù)池內(nèi)。
5、用計數(shù)筆在培養(yǎng)皿底面對所有的菌落逐個點數(shù)。每個數(shù)一個應聽到“嘟”聲才說明有效,否則應重點。此時,點到的菌落被標上顏色,顯示數(shù)字自動累加。
6、用放大鏡仔細檢查,確認點數(shù)無遺漏,計數(shù)即已完畢。
7、顯示的數(shù)字即為該培養(yǎng)皿內(nèi)的菌落數(shù)。
8、記錄數(shù)字后取出培養(yǎng)皿。按復“0”鍵,顯示恢復“000”,為另一培養(yǎng)皿的計數(shù)作好準備。
菌落計數(shù)器的注意事項:
1、儀器應放置在平整牢固的實驗臺上使用。
2、點數(shù)菌落時,計數(shù)筆不要過于傾斜,輕輕點下至有彈跳感,聽到“嘟”聲即可,如點按過重,易損壞計數(shù)筆。
3、儀器應防潮、防劇烈震動、防直接日光暴曬、防酸堿侵蝕,用后應加防塵罩。
4、注意防止細菌污染計數(shù)池。
5、如儀器發(fā)生不計數(shù)的問題,可按檢驗鍵。如計數(shù),說明計數(shù)筆壞。如仍不計數(shù),說明儀器本身有問題,若發(fā)現(xiàn)故障,請不要隨意拆卸,應請有經(jīng)驗的技術(shù)人員檢修。
菌落計數(shù)器的作用:
食品殺菌技術(shù)近幾年來逐漸被食品企業(yè)認可的一種方式。該技術(shù)在工人工作的同時,可以同步對空間空氣殺菌,對人體沒有任何傷害。
使得經(jīng)高溫后基本無菌的食品半成品,流轉(zhuǎn)至冷卻、挑選、包裝及灌裝等環(huán)節(jié)時,有效降低或避免這些空氣中含有的微生物附著在食品表面,再次污染食品,有效提高車間空氣和食品衛(wèi)生質(zhì)量。
極大的避免了休閑食品企業(yè)在檢測中出現(xiàn)菌落總數(shù)超標的現(xiàn)象。另外菌落計數(shù)器在這一技術(shù)中起到了非常重要的作用,菌落計數(shù)器可以把菌種放大2倍以上,以避免人為的失誤。
菌落計數(shù)器是一種數(shù)字顯示式自動細菌檢驗儀器。由計數(shù)器、探筆、計數(shù)池等部分組成,計數(shù)器采用CMOS集成電路精心設(shè)計,LED數(shù)碼管顯示,字高13mm,清晰明亮,配合專用探筆,計數(shù)靈敏準確。黑色背景式記數(shù)池內(nèi),熒光燈照明,菌落對比清楚,便于觀察。
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